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第203章 孙教授:打不过能加入吗?(2 / 2)

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王晓晴也有些意外地看向杨煦:「杨主任,你对基础分子实验也这麽有研究?」

杨煦故作谦虚:「医学是不分家的嘛,临床和基础本来就是相辅相成的,再说了,你们这套方案,为了补足二次抽提带来的浓度流失,肯定在沉淀前加了东西吧?」

王晓晴再度惊讶,乖巧点头:「确实。」

「5微升,5mg/mI的糖原,糖原作为共沉淀剂,不影响下游的PCR扩增,还能让微量的RNA在管底形成肉眼可见的沉淀团块,我说的对吧?」

「对的对的。」

王晓晴觉得杨煦有点厉害了,稍有些崇拜。

杨煦心里乐开了花,脸上云淡风轻。

他转过头,看了江河一眼,挑了挑眉毛。

江河默默地剥开一个橘子,把目光偏向窗外,看天。

想装就装吧,谁让你是我老师呢。

休息时间结束。

实验重新运转。

接下来的环节是沉淀後的无水乙醇洗涤。

王晓晴准备亲自操作移液枪。

杨煦在她旁边轻声提醒,美其名曰指导:「王教授,样本沉淀物很小,洗涤的时候,枪头最好贴着管壁对侧下去。」

「我知道。」

「吸的时候慢一点,拇指控制好二挡的回弹力度。」

「杨主任,你挡着我光了。」

「哦哦,抱歉,习惯性盯紧细节。」

就在这时,许久未见的孙长明教授来串门了。

「哎哟,都在忙呢?」

他今日看着心情不错,背着手,春风得意的。

目光扫过全场,看见杨煦也在,笑意更深:「老杨也在啊?怎麽,今天医院不忙啊?」

杨煦脸上的笑容一下就消失了,道:「来看看项目进度,你来干什麽?」

「我?我是来分享学术经验的。」

孙长明悠然道:「你们还在搞RNA提取?设备用得还习惯不?」

杨煦冷漠:「挺好的,不劳孙教授费心。」

孙长明嘿嘿一笑:「老杨啊,其实我今天过来是想说,我们研究所那边,消化道肿瘤的RNA提取纯化,刚刚取得了重大突破。」

此话一出,实验室里的众人都擡起了头。

孙长明:「大家都知道,消化液和血清里的RNA极其容易降解,我们团队花了一个月的时间,反覆调整试剂配比,终於摸索出了一套极限纯化的办法。」

王晓晴好奇道:「噢?说来听听。

孙长明坐直了身体,开始长篇大论:「最重要的就是放弃传统的Trizol,我们采用了矽胶膜离心柱法结合多重酶解,首先,在裂解阶段加入高浓度的蛋白酶K,56度水浴消化一个小时,然後,利用离心柱进行过柱,为了洗掉多糖杂质,我们专门配制了一种含高浓度盐酸胍和异丙醇的洗脱液,反覆洗脱三次。」

「虽然这个流程耗时要四个多小时,成本也高,但纯度那是没得说,A260/280的比值,我们稳定做到了1.75以上!这在当前的液体活检领域,绝对是领先水平!」

说完,孙长明往椅背上一靠,端起桌上的水杯喝了一口,等待着惊叹声。

1.75的纯度,在08年,确实值得骄傲。

然而,实验室里众人的表情都怪怪的。

大家面面相觑,好像不知道该说什麽好。

孙长明皱了皱眉:「怎麽?没听懂?也是,这套酶解过柱的体系确实复杂了点,你们刚接触湿实验,慢慢来————」

「不是,孙教授。」陈浩默默地举起了手,「我有个问题。」

「你说。」孙长明点点头。

陈浩语气真诚地发问:「既然是要解决蛋白污染和降解的问题,为什麽一定要用蛋白酶K去水浴消化一个小时,还要花那麽高成本去买离心柱反覆洗脱呢?」

孙长明愣了一下:「不用这些,你怎麽去蛋白?怎麽提纯?」

陈浩理所当然地回答:「双重氯仿抽提,加糖原共沉淀啊,我们老大提出来的这个方法,牺牲点第一次的上清液体积,再加一次氯仿离心,蛋白就全沉下去了,然後补5微升糖原把RNA析出来,整个流程下来四十分钟就搞定了,效果很好呀,为什麽要搞得像你那麽复杂?」

孙长明:「?」

反应了半天後,孙长明抗拒道:「不对,氯仿确实能去蛋白,但你抽提两次,水相里的RNA早就流失得七七八八了,就算加了糖原,浓度也绝对达不到下游要求,纯度就更别提了,能过1.5都算你们运气好。」

「可是————」蔡卓群在旁边忍不住插嘴。

「没什麽可是的,科研需要的是严谨,你们用这种糙办法,跑出来的数据全都是假阳性或者直接假阴性。」

就在这时,很巧嗷。

离心机跑的新一批内容出来了。

陈浩道:「孙教授,数据是不是真的,测一下就知道了。」

蔡卓群立刻上前,打开离心机盖,加入无酶水,溶解。

NanoDrop分光光度计前。

1微升的样本滴入基座。

测量!

屏幕刷新,一排数据跳了出来。

浓度:14.5ng/ul。

A260/280:1.95。

A260/230:2.03。

孙长明:「啊?」

1.8到2.0是RNA纯度的完美区间。

他引以为傲、耗时四小时、加了各种昂贵试剂才跑出的1.75。

可这个呢?

1.95是什麽鬼啊!

「换一管,再测。」孙长明不信邪。

蔡卓群依言换了第二个样本。

浓度:13.8ng/260/280:1.92。

第三管。

浓度:15.1ng/260/280:1.96。

极其稳定的高纯度,完美的数据重现性,没有任何悬念的绝对碾压。

孙长明,不嘻嘻。

陈浩在旁边补了一刀:「孙教授,你看,四十分钟提出来的,效果是不是比你那个好多了?」

杨煦绷不住了,哈哈大笑:「老孙啊,你那个蛋白酶K水浴一小时的方法,确实挺有创意的,就是费时费力还费钱,没关系,坚持你的想法,相信你一定行!」

孙长明沉默半天,最後也客气的笑道:「嗯————数据还算凑合吧,不过,不同组织的样本特性不一样,你们这套方法在血清上管用,在我们消化道黏液样本上,未必适用,科研嘛,就是要在不同的方向上多做尝试,加油吧。」

「哎呀,想起来了,我培养箱里的那些细胞还没换液呢,今天就不跟你们多聊了,走了啊。」

他说完,便朝门口走去。

轻轻的他走了,正如他轻轻的来,挥一挥衣袖,不带走一丝云彩~

出门。

孙长明伸手捂住胸口,喘不上气。

呃啊,难受啊!

「双重氯仿————糖原————」

孙长明一边扶着墙往研究所走,一边在嘴里反覆念叨着这几个词。

「妈的,这小子到底怎麽想出来的?这哪来的方法?我什麽时候能跟他一起做实验?」

孙教授试图依赖江河。

要不把项目组解散算了,打不过就加入吧?

王教授不都加入学生团队了吗,我就不行?

嗯————现在还来得及吗?

有没有什麽优雅的投靠姿势?在线等,挺急的。

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